Флюресцент шүүлтүүр нь флюресценцийн микроскопын чухал бүрэлдэхүүн хэсэг юм.Ердийн систем нь өдөөх шүүлтүүр, ялгаралтын шүүлтүүр, дихроик толь гэсэн гурван үндсэн шүүлтүүртэй.Тэдгээрийг ихэвчлэн шоо хэлбэрээр савласан байдаг бөгөөд ингэснээр бүлгийг микроскоп руу хамт оруулдаг.
Флюресцент шүүлтүүр хэрхэн ажилладаг вэ?
Өдөөлтийн шүүлтүүр
Өдөөлтийн шүүлтүүр нь тодорхой долгионы урттай гэрлийг дамжуулж, бусад долгионы уртыг хаадаг.Тэдгээрийг зөвхөн нэг өнгийг нэвтрүүлэхийн тулд шүүлтүүрийг тохируулах замаар өөр өөр өнгө гаргахад ашиглаж болно.Өдөөлтийн шүүлтүүрүүд нь урт дамжуулагч шүүлтүүр ба туузан дамжуулагч шүүлтүүр гэсэн хоёр үндсэн төрлөөр ирдэг.Өдөөгч нь ихэвчлэн флюрофорд шингэсэн долгионы уртыг дамжуулдаг зурвасын шүүлтүүр бөгөөд ингэснээр флюресценцийн бусад эх үүсвэрүүдийн өдөөлтийг багасгаж, флюресценцийн цацрагийн зурвас дахь өдөөх гэрлийг хаадаг.Зураг дээрх цэнхэр шугамаас харахад АД нь 460-495 бөгөөд энэ нь зөвхөн 460-495 нм флюресценцийг дамжуулж чадна гэсэн үг юм.
Энэ нь флюресцент микроскопын гэрэлтүүлгийн замд байрладаг бөгөөд флюрофорын өдөөх хүрээнээс бусад гэрлийн эх үүсвэрийн бүх долгионы уртыг шүүдэг.Шүүлтүүрийн хамгийн бага дамжуулалт нь зургийн тод, тод байдлыг тодорхойлдог.Ямар ч өдөөх шүүлтүүрийн дамжуулалтыг 40% -иас багагүй байлгахыг зөвлөж байна, ингэснээр дамжуулалт хамгийн тохиромжтой >85% байна.Өдөөлтийн шүүлтүүрийн зурвасын өргөн нь бүхэлдээ флюорофорын өдөөх хязгаарт багтах ёстой бөгөөд шүүлтүүрийн төвийн долгионы урт (CWL) нь фторфорын оргил долгионы урттай аль болох ойр байх ёстой.Өдөөлтийн шүүлтүүрийн оптик нягтрал (OD) нь дэвсгэр зургийн харанхуйг заадаг;OD нь дамжуулалтын хүрээ эсвэл зурвасын өргөнөөс гадуурх долгионы уртыг шүүлтүүр хэр сайн хааж байгааг хэмжих хэмжүүр юм.Хамгийн багадаа OD 3.0 байхыг зөвлөж байна, гэхдээ 6.0 ба түүнээс дээш OD байвал тохиромжтой.
Ялгарлын шүүлтүүр
Ялгарлын шүүлтүүр нь дээжээс хүссэн флюресценцийг детекторт хүргэх зорилготой.Тэд богино долгионы уртыг хааж, урт долгионы хувьд өндөр дамжуулалттай байдаг.Шүүлтүүрийн төрөл нь мөн тоотой холбоотой, жишээ нь зураг дээрх BA510IF (хөндлөнгийн саадтай шүүлтүүр) бөгөөд энэ тэмдэглэгээ нь хамгийн их дамжуулалтын 50% долгионы уртыг илэрхийлнэ.
Өдөөлтийн шүүлтүүрийн талаархи ижил зөвлөмжүүд нь ялгаруулалтын шүүлтүүрт хамаарна: хамгийн бага дамжуулалт, зурвасын өргөн, OD болон CWL.Тохиромжтой CWL, хамгийн бага дамжуулалт, OD хослол бүхий ялгаралтын шүүлтүүр нь хамгийн гүн түгжрэлтэйгээр хамгийн тод дүрсийг гаргаж, хамгийн бүдэг ялгарлын дохиог илрүүлэх боломжийг олгодог.
Дихрой толь
Дихрой толин тусгалыг өдөөх шүүлтүүр ба ялгаруулалтын шүүлтүүрийн хооронд 45 ° өнцгөөр байрлуулсан бөгөөд детектор руу ялгаралтын дохиог дамжуулахын зэрэгцээ флюрофор руу өдөөх дохиог тусгадаг.Тохиромжтой дихроик шүүлтүүр ба цацраг задлагч нь хамгийн их тусгал ба хамгийн их дамжуулалтын хооронд огцом шилжилттэй байдаг бөгөөд өдөөх шүүлтүүрийн зурвасын өргөний хувьд >95% тусгал, ялгаралтын шүүлтүүрийн зурвасын өргөний дамжуулалт >90% байна.Флюрофорын огтлолцлын долгионы уртыг (λ) харгалзан шүүлтүүрийг сонгож, төөрөгдөлд өртөх гэрлийг багасгаж, флюресцент дүрсийн дохио-шуугианы харьцааг дээд зэргээр нэмэгдүүлэх.
Энэ зураг дээрх дихроик толь нь DM505 бөгөөд 505 нанометр нь энэ толины хамгийн их дамжуулалтын 50% -ийн долгионы урт учраас ийм нэртэй болсон.Энэ толины дамжуулалтын муруй нь 505 нм-ээс дээш өндөр дамжуулалт, 505 нанометрийн зүүн талд дамжуулалтын огцом бууралт, 505 нанометрийн зүүн талд хамгийн их тусгалыг харуулсан боловч 505 нм-ээс бага дамжуулалттай байж болно.
Урт дамжуулалт ба туузан дамжуулалтын шүүлтүүрийн хооронд ямар ялгаа байдаг вэ?
Флюресценцийн шүүлтүүрийг урт дамжуулалт (LP) ба туузан дамжуулалт (BP) гэсэн хоёр төрөлд хувааж болно.
Урт дамжуулагч шүүлтүүр нь урт долгионы уртыг дамжуулж, богино долгионыг хаадаг.Таслах долгионы урт нь оргил дамжуулалтын 50% -д байгаа утга бөгөөд огтлолтоос дээш бүх долгионы уртыг урт дамжуулагч шүүлтүүрээр дамжуулдаг.Тэдгээрийг ихэвчлэн дихроик толь болон ялгаралтын шүүлтүүрт ашигладаг.Ашиглалтын явцад хамгийн их ялгаруулалтыг цуглуулах шаардлагатай үед болон спектрийн ялгаварлан гадуурхах нь хүсээгүй эсвэл шаардлагагүй үед урт нэвтрүүлэх шүүлтүүрийг ашиглах ёстой бөгөөд энэ нь ерөнхийдөө автофлуоресценцийн харьцангуй бага түвшинтэй сорьцонд нэг ялгаруулагч төрлийг үүсгэдэг датчикуудад тохиолддог.
Дамжуулах шүүлтүүр нь зөвхөн тодорхой долгионы зурвасыг дамжуулж, бусдыг блоклодог.Тэд флюрофорын ялгаруулалтын спектрийн зөвхөн хамгийн хүчтэй хэсгийг дамжуулах замаар хөндлөн огтлолцлыг багасгаж, автофлуоресценцийн дуу чимээг бууруулж, урт дамжуулалтын шүүлтүүр санал болгож чадахгүй өндөр арын автофлуоресценцийн дээж дэх дохио-дуу чимээний харьцааг сайжруулдаг.
BestScope хэдэн төрлийн флюресцент шүүлтүүрийн багц нийлүүлж чадах вэ?
Зарим түгээмэл төрлийн шүүлтүүрүүд нь цэнхэр, ногоон, хэт ягаан туяаны шүүлтүүрүүд юм.Хүснэгтэнд үзүүлснээр.
| Шүүлтүүрийн багц | Өдөөлтийн шүүлтүүр | Дихрой толь | Саад шүүлтүүр | LED чийдэнгийн долгионы урт | Өргөдөл |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485нм | ·FITC: Флюресцент эсрэгбиеийн арга ·Хүчиллэг жүрж: ДНХ, РНХ ·Аурамин: Сүрьеэгийн нян ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535нм | ·Rhodamine, TRITC: Флюресцент эсрэгбиеийн арга ·Пропидиум иодид: ДНХ · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365нм | ·Автофлюресценцийн ажиглалт ·DAPI: ДНХ-ийн будалт ·Hoechest 332528, 33342: Хромосомын будалтанд ашигладаг |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405нм | · Катехоламинууд ·5-гидрокси триптамин · Тетрациклин: Араг яс, шүд |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640нм | · Cy5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Флюресценцийг олж авахад ашигладаг шүүлтүүрийн багц нь флюресценцийн хэрэглээнд ашиглагддаг гол долгионы уртыг тойрон бүтээгдсэн бөгөөд энэ нь хамгийн их ашиглагддаг флуорофорууд дээр суурилдаг.Ийм учраас тэдгээрийг DAPI (цэнхэр), FITC (ногоон) эсвэл TRITC (улаан) шүүлтүүр шоо гэх мэт дүрслэлд зориулагдсан флюорофорын нэрээр нэрлэдэг.
| Шүүлтүүрийн багц | Өдөөлтийн шүүлтүүр | Дихрой толь | Саад шүүлтүүр | LED чийдэнгийн долгионы урт |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485нм |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365нм |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535нм |
| FL-Аурамин | BP470 | DM480 | BA485 | 450нм |
| Техасын улаан | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560нм |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560нм |
Флюресцент шүүлтүүрийг хэрхэн сонгох вэ?
1. Флюресценцийн шүүлтүүрийг сонгох зарчим нь флюресценц/цахилгаан гэрлийг дүрсний төгсгөлөөр аль болох хол нэвтрүүлэх, өдөөх гэрлийг нэгэн зэрэг бүрэн хааж, дохио дуу чимээний харьцааг хамгийн өндөр байлгахад оршино.Ялангуяа олон фотон өдөөлт ба дотоод тусгалын микроскопыг ашиглахад сул дуу чимээ нь дүрсний эффектэд ихээхэн саад учруулдаг тул дохио ба дуу чимээний харьцаанд тавигдах шаардлага өндөр байдаг.
2. Флуорофорын өдөөлт ба ялгаралтын спектрийг мэдэх.Хар дэвсгэр бүхий өндөр чанартай, өндөр тодосгогч дүрсийг үүсгэдэг флюресцент шүүлтүүрийн багцыг бүтээхийн тулд өдөөх болон ялгаруулах шүүлтүүрүүд нь флюрофорын өдөөх оргил цэгүүд эсвэл ялгаруулалттай тохирох бүс нутгуудад хамгийн бага нэвтрүүлэх зурвасын долгионтой өндөр дамжуулалтыг хангах ёстой.
3. Флюресценцийн шүүлтүүрийн бат бөх чанарыг анхаарч үзээрэй.Эдгээр шүүлтүүрүүд нь хэт ягаан туяа үүсгэдэг эрчимтэй гэрлийн эх үүсвэрийг нэвтрүүлэхгүй байх ёстой бөгөөд энэ нь "шатахад", ялангуяа гэрэлтүүлгийн эх үүсвэрийн бүрэн хүчин чадалд өртдөг өдөөгч шүүлтүүрт хүргэдэг.
Янз бүрийн флюресцент дээжийн зургууд
Эх сурвалжуудыг интернетэд цуглуулж, зохион байгуулдаг бөгөөд зөвхөн суралцах, харилцахад ашигладаг.Хэрэв ямар нэгэн зөрчил байвал бидэнтэй холбогдож устгана уу.
Шуудангийн цаг: 2022 оны 12-р сарын 09-ний өдөр